Erzeugung einer kortikalen Stichverletzung in einem Mausmodell, um eine reaktive Astrogliose zu induzieren

Sichern Sie eine anästhesierte Maus in einem stereotaktischen Rahmen.

Rasieren Sie den Kopf und desinfizieren Sie die Stelle. Tragen Sie eine Augensalbe auf, um ein Austrocknen der Hornhaut zu verhindern.

Mache einen Schnitt, um den Schädel freizulegen.

Entfernen Sie die darüber liegenden Membranen und reinigen Sie die Oberfläche mit Kochsalzlösung.

Markieren Sie eine Region auf dem Schädel, die auf die Hirnrinde abzielt.

Bohren Sie entlang des markierten Bereichs. Tragen Sie Kochsalzlösung auf, um die Hydratation des Gewebes aufrechtzuerhalten.

Entfernen Sie das gelöste Knochenstück und legen Sie die darunter liegende Hirnrinde frei.

Legen Sie in Kochsalzlösung getränkten Gelschaum auf, um ein Austrocknen des Gewebes zu verhindern und Blut aufzunehmen.

Positionieren Sie eine sterile Klinge, die an einem Sondenhalter befestigt ist, über dem Kortex. Entfernen Sie dann den Gelschaum.

Senken Sie die Klinge, um in die Hirnrinde einzudringen, und bewegen Sie sie in wiederholten Zügen horizontal, um eine mechanische Verletzung zu verursachen.

Entfernen Sie die Klinge und verwenden Sie Gelschaum, um das Blut aufzusaugen. Vernähen Sie den chirurgischen Schnitt.

An der Verletzungsstelle durchlaufen die Astrozyten eine reaktive Gliose, bei der sie aktiviert und vermehrt werden und schützende Moleküle freisetzen, die Entzündungen reduzieren und die Gewebereparatur unterstützen.

Platzieren Sie in diesem Schritt eine vollständig sedierte Maus im stereotaktischen Rahmen. Befestigen Sie seine Nase im Nasenkonus, der mit Isofluran verbunden ist. Ziehen Sie anschließend die Ohrbügel fest und stellen Sie sicher, dass der Kopf stabil steht.

Rasieren Sie den Kopf von der Augenhöhe bis zur Ohrhöhe. Sterilisieren Sie dann die Haut mit drei abwechselnden Peelings aus Isopropylalkohol und Betadin-Jodlösung. Tragen Sie anschließend Salbe auf beide Augen auf, um ein Austrocknen zu verhindern.

Überwachen Sie die Tiefe der Anästhesie des Tieres, indem Sie seine Zehe oder seinen Schwanz einklemmen. Die Maus befindet sich in der entsprechenden Operationsebene, wenn es keine Reaktion gibt und die Atmung langsam und gleichmäßig ist. Machen Sie einen parasagittalen Hautschnitt von knapp hinter den Augen bis fast zum Punkt zwischen den Ohren in einem einzigen festen Schnitt. Schieben Sie die Haut zur Seite und schneiden Sie die rechte Seite mit einem Hämostaten ab.

Entfernen Sie unter dem Mikroskop die darüber liegende Membran auf dem Schädel mit der stumpfen Seite des Skalpells und Applikatoren mit Wattespitze. Reinigen Sie dann den Schädel mit einem in 0,9%ige Kochsalzlösung getauchten Applikator mit Wattespitze und lassen Sie ihn vollständig trocknen. Markieren Sie mit einem kleinen Lineal und einem Permanentmarker den vorderen Rand der Kraniotomie in einem Winkel von 1 Millimeter kaudal zur Kronennaht und markieren Sie dann den linken Rand des Kraniotomies in einem Winkel von 1 Millimeter lateral zur sagittalen Naht.

Markieren Sie als nächstes den rechten und kaudalen Rand der Kraniotomie in einem Abstand von 4 Millimetern von der sagittalen bzw. koronalen Naht. Bohren Sie mit einem 0,5er Bohrer vorsichtig auf den Umriss des Permanentmarkers und achten Sie darauf, den Schädel nicht vollständig zu durchbrechen. Drücken Sie mit einer Pinzette vorsichtig auf das isolierte Stück Scheitelknochen. Der ausgedünnte Knochen ist bereit für die Entfernung, wenn er um den Umfang herum ausreichend schwach ist.

Tragen Sie nun mit einer 10-Milliliter-Spritze, die mit einer 23-Gauge-Nadel ausgestattet ist, eine kleine Menge 0,9 % Kochsalzlösung auf den isolierten Knochen und den gebohrten Bereich auf. Befestigen Sie den Manipulatorarm an der stereotaktischen Vorrichtung. Befestigen Sie dann eine neue Skalpellklinge mit der scharfen Seite nach rostral an der Sondenhalterung.

Halten Sie den Manipulatorarm aus dem Weg und heben Sie das Knochenstück vorsichtig mit einer abgewinkelten Pinzette an, indem Sie die Spitze in die Seite des Knochens einführen und in einer Bewegung abziehen. Legen Sie dann ein kleines Stück des getränkten, resorbierbaren Gelschaums auf das unbedeckte Gehirn, um ein Austrocknen zu verhindern und eventuell vorhandenes Blut aufzunehmen. Sobald der Gelschaum auf das Gehirn gelegt ist, schwenken Sie den Manipulatorarm an seinen Platz. Stellen Sie die Klinge so ein, dass sie über dem Gelschaum zentriert ist.

Entfernen Sie dann den Gelschaum und senken Sie die Klinge, bis die Spitze die Dura berührt, ohne sie zu durchstechen. Markieren Sie die dorsal-ventralen Koordinaten mit der Nonius-Skala am vertikalen Arm des stereotaktischen Rahmens. Als nächstes senken Sie die Klinge mit dem Manipulatorarm langsam genau 3 Millimeter in das Gehirn ab. Lassen Sie die Klinge 5 bis 10 Sekunden lang an Ort und Stelle bleiben.

Bewegen Sie dann den stereotaktischen Arm langsam mit der Klinge dreimal in rostral-kaudaler Richtung. Lassen Sie die Klinge die rostralen und kaudalen Grenzen der Kraniotomie erreichen, bevor Sie sich zum gegenüberliegenden Ende bewegen. Heben Sie anschließend langsam den stereotaktischen Arm an und entfernen Sie die Klinge aus dem Gehirn.

Legen Sie sofort ein weiteres Stück Gelschaum auf die Gehirnoberfläche, um überschüssiges Blut oder Flüssigkeit aufzunehmen. Entfernen Sie in der Zwischenzeit den stereotaktischen Arm und entsorgen Sie die Skalpellklinge. Sobald die Blutung gestoppt ist, entfernen Sie den Gelschaum.

Verschließen Sie die Wunde, indem Sie die Haut mit nicht resorbierbaren Nähten wie Ethilon oder Prolene vernähen und die Nähte 9 bis 10 Tage nach der Operation entfernen. Verabreichen Sie anschließend 0,5 bis 1 Milliliter Ringer-Lösung mit Laktat subkutan, um die Flüssigkeitszufuhr sicherzustellen.