Beurteilung der bakteriellen Besiedlung in einem Mäusegehirn nach einer Infektion mit Listeria monocytogenes

Nehmen Sie ein perfundiertes Mäusegehirn in Puffer.

Das Gehirn ist mit Streptomycin-resistenten Listeria monocytogenes, einem pathogenen Bakterium, infiziert.

Der Perfusionsschritt entfernt Blut aus dem Gehirn und stellt sicher, dass die Messungen der bakteriellen Belastung die Belastung mit Listeria monocytogenes im Gewebe widerspiegeln.

Als nächstes homogenisieren Sie das Gehirn mit einem sterilisierten Homogenisator, um das Gewebe abzubauen und Bakterien freizusetzen.

Bereiten Sie nun serielle Verdünnungen des Gehirnhomogenats mit Puffer vor.

Plattieren Sie diese Verdünnungen auf Gehirn-Herz-Infusions-Agarplatten, die Streptomycin, ein Antibiotikum, enthalten.

Inkubieren Sie die Platten. Der Hirn-Herz-Infusions-Agar liefert Nährstoffe für das Wachstum von Listeria monocytogenes, während Streptomycin nach resistenten Bakterien selektiert, so dass sich nur Streptomycin-resistente Listerien-Kolonien bilden können.

Zählen Sie die Anzahl der Kolonien auf der Platte, um die koloniebildenden Einheiten zu bestimmen, ein Maß für die lebensfähige infektiöse Bakterienlast im Gehirn.

Öffnen Sie mit einer Pinzette den Schädel, um das Gehirn freizulegen, und platzieren Sie einen Spatel zwischen der Unterseite des Gehirns und der Schädelbasis, um das Gehirn vorsichtig in ein 15-Milliliter-Röhrchen zu übertragen, das 5 Milliliter PBS mit 4 Grad Celsius enthält.

Führen Sie die Spitze in einer Biosicherheitswerkbank ein und lassen Sie einen Gewebehomogenisator 10 Sekunden lang in nacheinander 5 % Bleichmittel, sterilem Wasser, 75 % Ethanol und sterilen Wasserlösungen in separaten konischen 15-Milliliter-Röhrchen laufen. Wenn die Spitze gründlich sterilisiert wurde, homogenisieren Sie das infizierte Gehirn in seinem Röhrchen.

Bereiten Sie zehnfache serielle Verdünnungen jedes Organhomogenats in sterilem PBS vor und plattieren Sie die Verdünnungen auf Gehirn-Herz-Infusions-Agarplatten. Inkubieren Sie dann die Homogenatverdünnungskulturen über Nacht bei 37 Grad Celsius und zählen Sie die Anzahl der Kolonien auf jeder Platte, um die Gesamtzahl der Bakterien pro Organ oder Milliliter Blut zu bestimmen.