JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:31 Min. • July 8th, 2025
Im Gehirn des Zebrafisches exprimieren Neuronen Orexin- und Cannabinoid-Rezeptoren, die den Stoffwechsel regulieren.
In ernährungsinduzierten adipösen oder DIO-Zebrafischen kolokalisieren diese Rezeptoren zunehmend zu Heteromeren, was die nachgelagerte Signalübertragung verändert und die Stoffwechselregulation beeinflusst.
Entnehmen Sie Kryoschnitte des Hirngewebes sowohl von Kontroll- als auch von DIO-Zebrafischen. Waschen Sie die Abschnitte mit Puffer, um das Einbettmedium zu entfernen.
Mit einem Permeabilisierungs-blockierenden Puffer behandeln, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Bindungsstellen zu maskieren. Waschen, um überschüssigen Puffer zu entfernen.
Inkubieren Sie mit einem primären Antikörpercocktail, der auf die Rezeptoren abzielt. Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Inkubieren Sie mit verschiedenen Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden. Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fügen Sie einen fluoreszierenden DNA-bindenden Farbstoff hinzu, um den Zellkern zu markieren. Tragen Sie dann ein Eindeckmedium auf und versiegeln Sie die Abschnitte mit einem Deckglas.
Ermitteln Sie mit einem ko
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