JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:58 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Multiwell-Platte, die ein In-vitro-Blut-Hirn-Schranken- oder BHS-Modell enthält.
Dieses Modell besteht aus Endothelzellen, die an der oberen oder Blutseite haften, und Astrozyten an der unteren oder Gehirnseite eines matrixbeschichteten Membraninserts.
Geben Sie Fluorescein-Isothiocyanat oder FITC, einen Fluoreszenzfarbstoff, in die obere Kammer einer Kontrollvertiefung.
Umgekehrt geben Sie FITC-beladenes Ferritin oder FITC-Ferritin in die obere Kammer einer Probenvertiefung und inkubieren Sie dann.
In der Kontrollvertiefung bleibt das freie FITC auf die obere Kammer beschränkt, mit minimaler Durchquerung der BHS.
In der Probenvertiefung binden FITC-Ferritin-Komplexe an Rezeptoren auf den Endothelzellen.
Dies ermöglicht eine Rezeptor-vermittelte Internalisierung und den Transport in die untere Kammer.
Sammeln Sie anschließend regelmäßig Medium aus den unteren Kammern beider Vertiefungen und messen Sie die Fluoreszenzintensität.
Die Kontrolle weist eine geringere Fluoreszenz auf, während die Probe eine höhere Fluoreszenz aufweist, was die differentielle BHS-Permeabilität für FITC und FITC-Ferritin bestätigt.
Um den FITC-Ferritin-Fluss durch das Blut-Hirn-Schra
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