JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:59 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem genetisch veränderten Mauswelpen, der das CCM2-Gen trägt, das für die Stabilität der Blutgefäße unerlässlich ist.
Dieses Gen wird von zwei loxP-Stellen flankiert. Die Endothelzellen des Welpen exprimieren auch das Cre-Rekombinase-Enzym, das mit einem Östrogenrezeptor oder ER fusioniert ist.
Injizieren Sie dem Welpen intragastrisch 4-Hydroxytamoxifen oder 4-HT.
Das 4-HT diffundiert durch Endothelzellen und bindet an den Östrogenrezeptorteil des Cre-ER-Fusionsproteins.
Diese Bindung löst eine Konformationsänderung aus, die die Cre-Rekombinase aktiviert, die in den Zellkern der Endothelzellen gelangt und an die loxP-Stellen bindet.
Dies erleichtert das Rekombinationsereignis zwischen den loxP-Stellen, wodurch eine Schleife gebildet wird und das CCM2-Gensegment herausgeschnitten wird.
Der Verlust von CCM2 stört die Integrität der Endothelzellen und beeinträchtigt die Stabilität der Blutgefäßwände.
Dies führt zur Entwicklung geschwollener abnormaler Gefäßstrukturen, die als zerebrale kavernöse Malformationen oder CCMs bekannt sind und zerbrechlich und anfällig für Leckagen sind.
Beginnen Sie mit dem Auflösen von 4-HT in 100%igem Ethanol bis zu einer Konzentration von 10 Milligramm pro Milliliter. Bereiten Sie 30 Mikroliter Aliquots vor und lagern Sie sie dann bei minus 80 Grad Celsius. Verdünnen Sie am Tag der Anwendung das aliquotierte 4-HT in Maisöl auf 0,5 Milligramm pro Milliliter. Verwenden Sie dann eine Insulinspritze, um intragastrisch 50 Mikroliter 4-HT in P1-Neugeborene zu injizieren, um experimentelle CCM-Läsionen zu induzieren.