Gewinnung von Zellsuspensionen aus ischämischem Gewebe des Gehirns von Mäusen
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:47 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie perfundiertes ischämisches Hirngewebe von Mäusen, das Gehirnzellen und infiltrierte Immunzellen enthält.
Das Taschentuch auf einem Sieb zerkleinern und mit Puffer abspülen.
Das Filtrat zentrifugieren und den Überstand verwerfen.
Suspendieren Sie das Pellet in einer Verdauungsenzymlösung und geben Sie es in ein Mikrozentrifugenröhrchen.
Inkubieren Sie für die Verdauungsenzyme, um die extrazelluläre Matrix aufzubrechen und die Zellen zu lockern.
Die Suspension filtrieren und mit DNase-haltigem Puffer spülen, um kontaminierende DNA zu entfernen.
Anschließend mit DNase-freiem Puffer waschen.
Das Filtrat zentrifugieren und den Überstand verwerfen.
Resuspendieren Sie die Zellen in einem Dichtegradientenmedium. Dann den Inhalt in eine frische Tube geben und mischen. Zentrifuge, um die Komponenten nach Dichte zu trennen.
Entfernen Sie den Überstand, der Myelin und Schmutz enthält.
Resuspendieren Sie das Pellet in einem DNase-freien Puffer. Füllen Sie es in ein neues Röhrchen um und zentrifugieren Sie es erneut.
Der Überstand ist zu verwerfen, um eine ausreichende Entfernung des Dichtegradientenmediums sicherzustellen.
Zum Schluss resuspendieren Sie die Zellen für die weitere Ana
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