Auslösen und Überwachen von hitzeinduzierten Anfällen in einem transgenen Mausmodell

Nehmen wir eine anästhesierte transgene adulte Maus, die eine Genmutation trägt, die zu dysfunktionalen Natriumkanälen in den inhibitorischen Interneuronen führt.

Befestigen Sie eine geschmierte Rektumsonde, um die Körpertemperatur zu überwachen.

Legen Sie die Maus in einen Auffangkäfig, bis sich ihre Körpertemperatur stabilisiert hat.

Bringen Sie das Tier anschließend in eine vorgeheizte Wärmekammer und beginnen Sie mit der Videoaufnahme.

Erhöhen Sie die Temperatur der Kammer in regelmäßigen Abständen und überwachen Sie gleichzeitig den allmählichen Anstieg der Körpertemperatur der Maus.

Wenn die Körpertemperatur steigt, verschlimmert sich die Funktionsstörung der Natriumkanäle, wodurch die Freisetzung hemmender Neurotransmitter reduziert wird.

Diese verminderte Freisetzung stört das Gleichgewicht zwischen neuronaler Erregung und Hemmung, was zu neuronaler Übererregbarkeit und Krampfanfällen führt.

Notieren Sie die Körpertemperatur während des Anfalls und notieren Sie deren Verhaltensmerkmale.

Legen Sie nun die Maus auf ein Kühlkissen, bis sich ihre Körpertemperatur normalisiert hat.

Entfernen Sie abschließend die Rektalsonde und lassen Sie die Maus sich erholen.

Schalten Sie zunächst die Wärmekammer der Maus mit der Einschalttaste ein und drücken Sie dann die Einschalttaste. Stellen Sie über die Tastatur des digitalen Temperaturreglers die Temperatur der Wärmekammer auf 50 Grad Celsius ein. Legen Sie den Boden der Wärmekammer mit Lehmbettwäsche aus.

Montieren Sie eine Videoaufzeichnungskamera vor der Wärmekammer. Legen Sie eine Petrischale mit einem Durchmesser von 140 Millimetern mit dicken Schichten Seidenpapier aus und legen Sie sie als Kühlkissen auf Eis. Stellen Sie für den Screening-Assay sicher, dass das Körpergewicht der Maus 15 Gramm oder mehr beträgt. Vergewissern Sie sich vor Beginn des Eingriffs, dass die Maus vollständig betäubt ist und sich in den Zeh kneift.

Beschichten Sie die Metallspitze des rektalen Temperaturfühlers mit einem Gleitmittel und führen Sie es vorsichtig in die Maus ein. Befestigen Sie die Rektalsonde mit Klebeband am Schwanz der Maus. Setzen Sie die Maus in einen neuen Erholungskäfig, der mit Lehmbettwäsche ausgekleidet ist. Starten Sie einen Timer und beobachten Sie die Maus 5 Minuten lang, während Sie die Körperkerntemperatur überwachen, bis sich die Maus vollständig von der Narkose erholt hat und sich die Temperatur bei 35 bis 36 Grad Celsius stabilisiert.

Notieren Sie nach 5 Minuten die Körpertemperatur der Maus als anfängliche Körpertemperatur bei 0 Minuten. Bringen Sie die Maus schnell auf den Boden der vorgeheizten Maus-Wärmekammer, um den Versuch des Experiments zu starten. Nachdem die Maus in die vorgeheizte Mauskammer eingelegt wurde, starten Sie die Kamera und die Stoppuhr.

Erhöhen Sie die Temperatur der Wärmekammer in regelmäßigen Abständen, so dass die Körpertemperatur der Maus mit einer Rate von 0,25 bis 0,5 Grad Celsius pro Minute ansteigt. Beginnen Sie mit der Aufzeichnung der Körpertemperatur der Maus in Abständen von 1 Minute für die Dauer des Experiments. Stellen Sie bei 9,5 Minuten die Temperatur der Wärmekammer auf 55 Grad Celsius ein, um die Temperatur der Wärmekammer bis zur 10. Minute bei 55 Grad Celsius zu stabilisieren.

Erreichen Sie in ähnlicher Weise bis zur 20. Minute eine stabile Temperatur der Wärmekammer auf 60 Grad Celsius. Jeder Anfallsscreening-Versuch dauert 30 Minuten. Wenn die Maus einen Anfall erleidet, notieren Sie die Körpertemperatur der Maus während des Anfalls als Anfallsschwellentemperatur. Beachten Sie die von der Maus angezeigten Merkmale des Anfallsverhaltens.

Nehmen Sie dann die Maus schnell aus der Kammer und legen Sie sie auf das Kühlkissen. Wenn die Körpertemperatur der Maus auf 36 bis 37 Grad Celsius sinkt, bringen Sie die Maus in einen Erholungskäfig. Um die Rektalsonde von der Maus zu entfernen, schneiden Sie vorsichtig das Klebeband zwischen dem Mausschwanz und dem Kabel der Rektussonde ab.