Immunfärbung von Interneuronen in einem Hippocampus-Schnitt an der Ratte

Nehmen wir einen fixierten Hippocampus-Schnitt der Ratte, der ein Interneuron enthält, das mit Biocytin, einem Biotin-konjugierten Molekül, gefüllt ist.

Fügen Sie als Nächstes eine Lösung hinzu, die blockierende Proteine und ein nichtionisches Detergens enthält, um eine unspezifische Bindung zu verhindern und Neuronen zu permeabilisieren.

Inkubieren Sie mit einem primären Antikörper, der auf spezifische Cannabinoidrezeptoren auf Interneuronen abzielt.

Mit Puffer waschen, um überschüssige Antikörper zu entfernen.

Fügen Sie dann einen Streptavidin-konjugierten Fluoreszenzfarbstoff und einen Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörper hinzu.

Während der Inkubation bindet Streptavidin stark an Biocytin, was die Visualisierung des mit Biocytin gefüllten Interneurons ermöglicht, während der sekundäre Antikörper auf rezeptorgebundene primäre Antikörper auf den Interneuronen abzielt.

Mit Puffer spülen und ungebundene Moleküle entfernen.

Montieren Sie nun den Abschnitt mit wässrigen Einbettmedien. Positionieren Sie ein Deckglas und versiegeln Sie es.

Visualisieren Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die Expression des mit Biocytin gefüllten Interneurons und des Cannabinoidrezeptors, was eine