JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:02 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie feste rektale Saugbiopsieschnitte beim Menschen mit exponierten Proteinantigenen und inaktivierten endogenen Peroxidasen.
Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Ersetzen Sie die Blockierungslösung durch primäre Antikörper, die an das Zielprotein der Gliazelle, S-100, binden, einen Marker für Morbus Hirschsprung.
Entfernen Sie ungebundene Antikörper und inkubieren Sie mit Peroxidase-Polymeren, um das Signal zu verstärken.
Waschen, um überschüssiges Polymer zu entfernen. Fügen Sie Sekundärantikörper hinzu, die an Enzympolymere und Primärantikörper binden.
Entfernen Sie ungebundene Antikörper und fügen Sie ein chromogenes Substrat hinzu.
Die Peroxidasen reagieren mit dem Substrat und bilden einen farbigen Niederschlag.
Spülen Sie, um überschüssigen Niederschlag zu entfernen.
Füge einen Farbstoff hinzu, um die Zellkerne zu färben.
Mit einer Säure-Ethanol-Lösung waschen, um überschüssigen Farbstoff zu entfernen.
Als nächstes dehydrieren Sie die Abschnitte mit steigenden Konzentrationen von Ethanol, gefolgt von Xylol.
Zum Schluss montieren und unter einem Mikroskop beobachten, um die Färbung zu visualisieren, die auf das
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