Induktion einer gezielten neuronalen Schädigung mit einem Hochleistungslaser in einer Drosophila-Larve

Legen Sie eine betäubte Drosophila-Larve mit dem Kopf nach oben auf einen Öltropfen auf einem Objektträger mit Vakuumfettflecken.

Positionieren Sie ein Deckglas und drücken Sie es vorsichtig an, um Kontakt mit der Larve aufzunehmen.

Passen Sie die Larve so an, dass die Region freigelegt wird, in der sich die Zielneuronen befinden, die fluoreszierende Proteine exprimieren.

Befestigen Sie den Objektträger an einem Zwei-Photonen-Mikroskop.

Verwenden Sie einen Laser mit geringer Leistung, um Schäden zu minimieren, und scannen Sie die Larve, um die Region mit den fluoreszierenden Zielneuronen zu lokalisieren.

Passen Sie als Nächstes das Scanfenster so an, dass es sich auf die Zielregion konzentriert, die Axone enthält, eine Art neuronaler Projektionen.

Reduzieren Sie nun die Abtastrate und erhöhen Sie die Laserleistung.

Der Hochleistungslaser trifft auf die anvisierten Axone und erzeugt eine lokale Wärme, die sie schädigt und die Fluoreszenz um die Verletzungsstelle herum verstärkt.

Wechseln Sie schließlich wieder in den Lasermodus mit geringer Leistung. Das Vorhandensein kleiner, kraterartiger, ringförmiger Strukturen an der Verletzungsstelle bestätigt die erfolgreiche neuronale Schädi