Etablierung eines Modells für Subarachnoidalblutungen an der Ratte, das durch autologe Blutinjektion induziert wird

Nehmen wir eine anästhesierte Ratte, deren Schädel freigelegt und eine Sonde implantiert wurde, um den Hirndruck zu messen.

Markieren Sie mit einem Referenzpunkt auf dem Schädel die Zielstelle und bohren Sie ein Loch.

Entferne die Knochenfragmente und fülle das Loch mit Knochenwachs.

Bohren Sie ein weiteres Loch. Lokalisieren Sie ein Blutgefäß und befestigen Sie eine Sonde, um den zerebralen Blutfluss zu messen.

Nehmen Sie eine Nadel und führen Sie sie in das Gehirn ein, bis der Schädel zu spüren ist.

Ziehen Sie sich leicht zurück, um sicherzustellen, dass es vor dem Chiasma opticum platziert wird, wo sich die wichtigsten Blutgefäße befinden.

Füllen Sie die Nadelkammer mit frischem Blut aus dem Schwanz der Ratte und schließen Sie die Spritze mit dem Blut an.

Injizieren Sie das Blut in den flüssigkeitsgefüllten Subarachnoidalraum zwischen der äußeren und inneren Hirnmembran, was den Hirndruck erhöht und zu einer Verengung der Blutgefäße führt.

Dies führt zu einer verminderten zerebralen Durchblutung, wodurch ein Subarachnoidalblutungsmodell etabliert wird.

Um die Laser-Doppler-Sonde zu platzieren, machen Sie einen 15-Millimeter-Schnitt kaudal in der Mittellinie, beginnend direkt vor den Augen. Nachdem Sie das Bindegewebe und die Muskeln mit einer Pinzette entfernt haben, verwenden Sie das Ende eines sterilen Wattestäbchens als Regime, um das Bregma und die koronalen Nähte zu identifizieren.

Nach dem Platzieren des bewaffneten Retraktors wird eine 25-Gauge-Spinalnadel im stereotaktischen Rahmen genau auf das Bregma gesetzt und die Position notiert. Entfernen Sie anschließend die Nadel aus dem Bregma. Verschieben Sie den Rahmen um 6,5 Millimeter nach vorne, und setzen Sie dann die Nadel in der Mittellinie wieder ein, um die Seite des Bohrens zu markieren.

Bohren, bis die Dura mater unterhalb des Knochens identifiziert ist. Entfernen Sie mit einer geraden Pinzette vorsichtig die Knochenfragmente und füllen Sie dann den Hohlraum mit Knochenwachs. Bohren Sie dann 3 bis 4 Millimeter lateral rechts vom Bregma und knapp vor der koronalen Naht für den Laserdoppler ein weiteres Loch und achten Sie darauf, dass es nicht in die Dura mater eindringt.

Suchen Sie nach den Gefäßen, in denen der Laserdoppler den Blutfluss messen kann. Platzieren Sie den Laserdoppler und überprüfen Sie die Werte. Es ist ein Mindestwert von 100 Flussmitteleinheiten erforderlich. Wenn die Werte nach dem Entfernen des Mikroskops weiterhin akzeptabel sind, fügen Sie 1 Tropfen Kleber hinzu, um die Sonde zu fixieren. Überprüfen Sie erneut, ob der Wert über 80 Flusseinheiten liegt.

Um eine Subarachnoidalblutung auszulösen, führen Sie die Nadel vorsichtig durch den Schädel in der Mittellinie zwischen den Hemisphären ein, bis ein Widerstand durch die Schädelbasis zu spüren ist. Ziehen Sie die Nadel um 1 Millimeter zurück, um die korrekte Platzierung direkt vor dem Chiasma opticum zu gewährleisten. Um ein möglichst homogenes Ergebnis bei der Blutinjektion zu erzielen, drehen Sie die Nadel um 90 Grad im Uhrzeigersinn, so dass die Nadelspitze nach rechts zeigt. Entfernen Sie dann den Stiletto.

Passen Sie nach einer 15-minütigen Äquilibrierung die Anästhesiestärke an, um einen mittleren arteriellen Blutdruck im Bereich von 80 bis 100 Millimeter Quecksilbersäule zu erhalten. Führen Sie dann eine Blutgasanalyse durch, um zu bestätigen, dass der pH-Wert, der Partialdruck von Kohlendioxid und der Partialdruck von Sauerstoff innerhalb der physiologischen Parameter liegen.

Entnehmen Sie anschließend mit einer 1-Milliliter-Spritze und einer stumpfen 23-Gauge-Nadel 500 Mikroliter Blut aus dem Schwanzkatheter. Um eine Injektion von Luft zu vermeiden, füllen Sie den Totraum der Spinalnadelkammer mit Blut. Nachdem Sie das Volumen des Blutes in der Spritze auf 300 Mikroliter eingestellt haben, verbinden Sie die Spritze mit der Spinalnadel. Halten Sie dann die Spritze fest und injizieren Sie das Blut manuell, um den mittleren arteriellen Druck zu überschreiten. Beobachten Sie einen steilen Anstieg des intrazerebralen Drucks und einen gleichzeitigen starken Abfall des zerebralen Blutflusses.