JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:09 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie fixierte und permeabilisierte Neuronen in einer Röhre.
Fügen Sie einen Blockierungspuffer hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Die Suspension zentrifugieren und den Überstand entfernen. Suspendieren Sie dann die Neuronen im Puffer.
Die Suspension gleichmäßig in Röhrchen mit unmarkierten und fluorophormarkierten Primärantikörpern überführen.
Inkubieren, so dass die Antikörper spezifisch an die Untereinheiten der mitochondrialen Atmungskette oder des MRC-Komplexes, ein mitochondriales DNA-assoziiertes Protein und ein mitochondriales äußeres Membranprotein in den Neuronen binden können.
Entfernen Sie alle ungebundenen Antikörper.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die an die nicht markierten Primärantikörper binden.
Die Mischung zentrifugieren und den Überstand verwerfen.
Resuspendieren Sie die Neuronen in Puffer und übertragen Sie sie in Mikrozentrifugenröhrchen.
Durchführung einer Durchflusszytometrie zum Nachweis der Fluoreszenzsignale auf den markierten Neuronen, die den Expressionsniveaus der MRC-Komplexuntereinheiten und der Messung der relativen mitochondrialen DNA-Spiegel entsprechen.
Blockieren Sie die Proben in 1
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