JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:14 Min. • July 8th, 2025
Die Regionen des Locus coeruleus, die sich bilateral im Hirnstamm der Maus befinden, enthalten Noradrenalin-produzierende Neuronen und regulieren verschiedene Regionen im Gehirn.
Um diese Locus coeruleus-Regionen zu erkennen, beginnen Sie mit einem Objektträger mit den festen, kryokonservierten Hirnstammschnitten der Maus.
Waschen Sie den Objektträger mit einem Puffer, um Fixierspuren zu entfernen.
Fügen Sie einen Puffer mit Reinigungsmittel hinzu und inkubieren Sie, um die Membranen zu permeabilisieren, und waschen Sie sie dann.
Einführung von Primärantikörpern, die spezifisch für das Enzym Dopamin β-Hydroxylase sind, das Dopamin in Noradrenalin, einen Neurotransmitter, umwandelt.
Inkubieren, damit die Antikörper mit Dopamin β-Hydroxylase interagieren können.
Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fügen Sie dann grüne Fluorophor-gekoppelte Sekundärantikörper hinzu und inkubieren Sie im Dunkeln.
Die Sekundärantikörper binden an die Primärantikörper und waschen sich dann.
Geben Sie Einbettmittel auf die Gehirnabschnitte, decken Sie sie ab und trocknen Sie sie.
Betrachten Sie die Objektträger unter einem Fluoreszenzmikroskop.
Die grüne Fluoreszenz, die die markierten Noradr
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