JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:29 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir eine betäubte Maus, der eine Führungskanüle in ihr Gehirn implantiert wurde.
Eine Dummy-Sonde im Inneren der Kanüle verhindert das Eindringen von Geweberesten.
Lege der Maus ein Halsband um den Hals.
Ersetzen Sie die Dummy-Sonde durch eine Mikrodialysesonde, die eine spezielle semipermeable Membran enthält, die den Fluss von Molekülen mit hohem Molekulargewicht ermöglicht.
Die Sonde wird über Einlass- und Auslassöffnungen mit Pumpen verbunden, um den Fluss eines physiologischen Puffers zu regulieren.
Binden Sie die Maus mit dem Halsband in einen Käfig, lassen Sie sie sich erholen und initiieren Sie den Fluss.
Der Puffer dringt durch den Einlass in das Hirngewebe ein und vermischt sich mit der interstitiellen Flüssigkeit (ISF) im extrazellulären Raum, der Proteine enthält, die an der zellulären Kommunikation beteiligt sind.
Die Bestandteile diffundieren über die Membran und werden fraktioniert durch den Auslass gesammelt.
Das gesammelte ISF, das extrazelluläre Proteine enthält, ist bereit für die Analyse.
Legen Sie den Kragen um den Hals des implantierten Tieres mit der anästhesierten Führungskanüle und entfernen Sie die Hutmutter und die Dummy-Sonde. Führen Sie die Mikrodialysesonde langsam durch die Führungskanüle ein und befestigen Sie die Hutmutter.
Setze dann die Maus in einen Käfig, der mit einem frei beweglichen System verbunden ist, und binde die Maus mit dem Halsband fest. Stoppen Sie nach mindestens einer Stunde nacheinander die Rollenpumpe und die Spritzenpumpe, starten Sie die Pumpen neu, wobei die Spritzenpumpe auf 20 % schneller als die Rollenpumpe eingestellt ist, und legen Sie das freie Ende des Auslassschlauchs auf einen gekühlten Fraktionssammler, um den ISF des Gehirns aufzufangen. Wenn das entsprechende experimentelle Volumen erreicht wurde, entfernen Sie die Sonde und führen Sie die Mauswiederherstellung wie gerade gezeigt durch.