Behandlung von koronalen Schnitten der Ratte mit einem neurotoxischen Peptid

Nehmen Sie einen koronalen Hirnschnitt der Ratte und schneiden Sie ihn entlang der Mittellinie, um Hemischeiben zu erhalten, wobei Sie sicherstellen, dass beide für Kontroll- und Testexperimente aus derselben anatomischen Region stammen.

Übertragen Sie die Hemischeiben zur Gewinnung in sauerstoffhaltiges aCSF.

Legen Sie sie anschließend in Fläschchen mit aCSF für die Kontrolle und aCSF mit einem neurotoxischen Peptid für den Test.

Verschließen Sie die Fläschchen mit sauerstoffhaltigen Nadeln, um das Gewebe mit Sauerstoff zu versorgen und zu inkubieren.

Im Testfläschchen bindet das neurotoxische Peptid an seinen neuronalen Rezeptor und stört so die normale neuronale Signalübertragung.

Diese gestörte Signalübertragung führt zu einer Akkumulation neurotoxischer Proteine und verändert Mikrotubuli-assoziierte Proteine, wodurch die Neurodegeneration gefördert wird.

Nach der Inkubation werden die Hemischeiben in Röhrchen mit gekühltem Lysepuffer überführt.

Homogenisieren Sie das Gewebe, um zelluläre Inhalte freizusetzen, während Inhibitoren im Puffer den Proteinabbau verhindern.

Zentrifugieren und sammeln Sie den Überstand mit löslichen Proteinen und lagern Sie ihn für die weitere Analyse