Untersuchung der Lymphozytentransmigration durch eine mikrovaskuläre Endothelzell-Monoschicht

Nehmen Sie eine Mikroplatte mit Transwell-Einsätzen, die mit EZM-Proteinen beschichtet sind, um die Zelladhäsion zu fördern.

Mikrovaskuläre Endothelzellen (HBMECs) des menschlichen Gehirns werden in die Einsätze und ein Wachstumsmedium in die unteren Kompartimente gegeben.

Inkubieren, damit die Zellen anhaften und zu einer Monoschicht heranwachsen können. Diese Zellen exprimieren Tight Junctions, die das Endothel der Blut-Hirn-Schranke nachahmen, das den Durchgang von Zellen und Molekülen einschränkt.

Entfernen Sie das Medium. Geben Sie periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) in die Einsätze und ein Kulturmedium in die unteren Kompartimente.

Inkubieren, wodurch PBMC-Lymphozyten mit den Endothelzellen interagieren und dann zwischen ihnen hin- und herwandern können, ein Prozess, der als Transmigration bezeichnet wird.

Spülen Sie den Einsatzboden aus und sammeln Sie die anhaftenden transmigrierten Zellen in den unteren Kammern.

Einführung fluoreszierender Mikrokügelchen als Referenz für die Zellquantifizierung.

Übertragen Sie die Suspension in ein Röhrchen, zentrifugieren Sie, verwerfen Sie den Überstand und resuspendieren Sie sie in einem Fluorophor-konjugierten Antikörpercocktail,