JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:58 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen fixierten Schnitt aus dem Gehirn einer Maus, der den Nucleus basalis von Meynert enthält, der reich an Nervenfasern ist, die das Enzym Cholinacetyltransferase exprimieren.
Der Abschnitt wird vorbehandelt, um die endogene Peroxidase zu deaktivieren.
Fügen Sie ein Detergens hinzu, um die Zellmembranen zu permeabilisieren, gefolgt von einer Blockierungslösung, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Ersetzen Sie die Lösung durch Primärantikörper, die an Cholinacetyltransferase binden.
Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Inkubieren Sie mit Biotin-markierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden.
Entfernen Sie ungebundene Antikörper und fügen Sie Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplexe hinzu, die an die Sekundärantikörper binden.
Waschen, um überschüssige Komplexe zu entfernen.
Fügen Sie ein chromogenes Substrat hinzu, das mit Peroxidase reagiert und einen farbigen Niederschlag bildet.
Mit destilliertem Wasser abspülen, um überschüssigen Niederschlag zu entfernen.
Übertragen Sie den Schnitt auf einen gelatinierten Objektträger.
Als nächstes dehydrieren Sie den Abschnitt mit steigenden Ethanolkonzentrationen, gefolgt von
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