Fluoreszenzfärbung von Neuralleistenzellen, die auf Hydrogelen unterschiedlicher Steifigkeit kultiviert wurden

Nehmen wir adhärente Neuralleisten-Zellkulturen, die auf Deckgläsern gezüchtet wurden, die mit Hydrogelen unterschiedlicher Steifigkeit beschichtet waren. Waschen Sie die Zellen mit Puffer.

Fügen Sie Paraformaldehyd hinzu, um die Zellen zu fixieren und die Zellmorphologie zu erhalten.

Waschen Sie die Zellen mit Puffer, um überschüssiges Paraformaldehyd zu entfernen.

Fügen Sie als Nächstes ein nichtionisches Detergens hinzu, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.

Waschen Sie die Zellen mit Puffer, um überschüssiges Reinigungsmittel zu entfernen.

Führen Sie dann eine Blockierungslösung ein, um unspezifische Bindungen zu verhindern.

Inkubieren Sie die Zellen mit einer hochaffinen filamentösen Aktinsonde, die an Aktinfilamente bindet.

Waschen Sie die Zellen mit Puffer, um ungebundene Sonden zu entfernen.

Fügen Sie einen fluoreszierenden Kernfarbstoff hinzu, um die Kerne zu färben, und waschen Sie ihn dann mit Puffer, um überschüssigen Farbstoff zu entfernen.

Tragen Sie Eindeckmittel auf die Deckgläser auf und untersuchen Sie die gefärbten Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop.

Zellen, die

auf steiferen Hydrogelen gezüchtet wurden, zeigen eine erhöhte Aktinfilamentbildung und eine