Immunfärbung von fluoreszenzmarkierten Astrozyten in einem Schnitt aus einem Gewebeschnitt aus dem Gehirn einer Maus

Nehmen Sie einen fixierten Gewebeschnitt aus dem Gehirn einer Maus, der eine spärliche Population von Astrozyten enthält, die ein fluoreszierendes Protein exprimieren.

Behandeln Sie den frei schwebenden Abschnitt mit einem detergenzienhaltigen Puffer, um die Zellen zu permeabilisieren.

Inkubieren Sie den Abschnitt in einem Blockierungspuffer, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Behandeln Sie den Abschnitt mit Primärantikörpern und inkubieren Sie, damit die Antikörper an die fluoreszierenden Proteine in den Astrozyten binden können.

Überschüssige Primärantikörper werden mit Puffer abgewaschen.

Inkubieren Sie anschließend den Abschnitt mit Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden.

Ungebundene Sekundärantikörper mit einem Puffer abwaschen.

Übertragen Sie den Abschnitt in ein Puffer-deionisiertes Wassergemisch, um Waschmittelrückstände zu entfernen.

Legen Sie den Abschnitt auf einen Objektträger mit pufferdeionisiertem Wasser. Entfernen Sie überschüssige Flüssigkeit und fügen Sie Einbettmedien hinzu. Positionieren Sie dann ein Deckglas und befestigen Sie es.

Verwenden Sie abschließend die konfokale Mikroskopie, um die markierten f