JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:03 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir ein menschliches postmortales Kleinhirngewebe, das die Purkinje-Zell-, Körner- und Molekülzellschichten enthält.
Legen Sie es auf einen Kryostat-Probenhalter, der teilweise gefrorene Einbettmedien enthält.
Lassen Sie das Medium vollständig einfrieren und sichern Sie das Gewebe.
Übertragen Sie diese Baugruppe in den Kryostat-Schneidarm und lassen Sie das Gewebe sich an die Kryostatentemperatur akklimatisieren.
Bewegen Sie das Gewebe näher an die Klinge und schneiden Sie es ab, um die Kortexschichten freizulegen.
Platzieren Sie eine Abrollschutzplatte über der Klinge und erhalten Sie Kleinhirnabschnitte.
Übertragen Sie diese Abschnitte auf einen Membranschieber.
Inkubieren Sie in steigenden Ethanolkonzentrationen zur Gewebefixierung und Dehydratisierung.
Dann in Xylol inkubieren.
Trocknen Sie den Objektträger und legen Sie ihn auf einen UV-Laser-Capture-Mikroskoptisch.
Positionieren Sie die Entnahmekappe über dem Kleinhirngewebe.
Konzentrieren Sie sich mikroskopisch auf die Purkinje-Zellen.
Erfassen und sammeln Sie mit dem Laser die Purkinje-Zellen für die weitere Analyse.
Schneiden Sie zunächst ein kleines Stück Gewebe für den Schnitt ab und stellen Sie sicher, dass der S
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