Induktion eines Schlaganfalls der weißen Substanz in einem Mausmodell unter Verwendung eines Stickstoffmonoxid-Inhibitors

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus, die in einem stereotaktischen Rahmen mit einem freiliegenden Schädel immobilisiert ist.

Markieren Sie das Bregma und bohren Sie dann ein Loch, das nach hinten am Bregma beginnt und sich nach vorne, direkt links von der Mittellinie, erstreckt.

Entfernen Sie Gewebeschichten, um die myelinisierte axonreiche Großhirnrinde freizulegen, und tragen Sie Salztropfen auf, um ein Austrocknen des Gewebes zu verhindern.

Befestigen Sie eine mit einem Stickstoffmonoxid-Inhibitor gefüllte Pipette an einem Injektorarm, der für eine präzise Injektion in einem Winkel positioniert ist.

Passen Sie die stereotaktischen Koordinaten an und injizieren Sie den Inhibitor in die weiße Substanz der Großhirnrinde, wobei Sie die Pipette kurz halten, um einen Rückfluss zu verhindern.

Ziehen Sie die Injektion zurück und wiederholen Sie sie an anderen Koordinaten.

Verschließen Sie später das Loch und verschließen Sie den Schnitt mit Klebstoff.

Die Inhibitoren binden an Stickstoffmonoxid-produzierende Enzyme in den Endothelzellen der Blutgefäße, hemmen die Stickoxidproduktion und verengen die Blutgefäße.

Diese Verengung hemmt den Blutfluss, was zu neuronalen Schäden und Läsionsbildung führt, was zu einem Schlaganfall der weißen Substanz führt.

Beginnen Sie damit, zuerst eine gezogene Glaspipette an einem Schlauch zu befestigen, der an einer Vakuumleitung befestigt ist. Führen Sie das gezogene Ende in die L-Nio-Lösung oder L-Nio plus fluoreszierenden Tracer ein. Starten Sie das Vakuum und saugen Sie, bis mindestens 2 Millimeter des Teils der Pipette mit einem Durchmesser von 0,5 Millimetern gefüllt sind.

Legen Sie die gefüllte Pipette zur Seite. Setzen Sie dann die Maus in ein stereotaktisches Gerät, das mit einem stereotaktischen Mikroskop ausgestattet ist. Überprüfen Sie nach der Betäubung und Vorbereitung der Maus für die Operation nach zugelassenen Verfahren die Narkosetiefe mit einem Zehenkneifen. Es sollte keine Antwort geben.

Stellen Sie anschließend den Injektionsarm auf 36 Grad ein. Befestigen Sie einen Pipettenhalter aus gezogenem Glas am distalen Ende eines Injektionssystems mit niedrigem Volumen und befestigen Sie ihn am Injektionsarm. Nachdem Sie einen 1,5 Zentimeter langen Schnitt in der Mittellinie der Kopfhaut gemacht haben, um den Schädel freizulegen, trocknen Sie den oberflächlichen Schädel mit einem Wattestäbchen.

Während Sie dann durch ein stereotaktisches Mikroskop mit 1- bis 3-facher Vergrößerung schauen, verwenden Sie ein Mikropunktwerkzeug, um das darüber liegende periostale Gewebe zu entfernen. Markieren Sie das Bregma mit einem feinen Spitzenmarker, dann verwenden Sie einen chirurgischen Bohrer, der mit einem chirurgischen Bohrer mit feiner Spitze ausgestattet ist, um eine 2 Millimeter lange elliptische Kraniotomie zu bohren, die posterior am Bregma beginnt und sich nach anterior knapp links von der Mittellinie erstreckt.

Entfernen Sie Knochenfragmente und darüber liegendes Weichgewebe, damit die Großhirnrinde sichtbar gemacht werden kann. Halten Sie die kortikale Oberfläche feucht, indem Sie intermittierend Tropfen sterile Kochsalzlösung auftragen. Befestigen Sie anschließend die gefüllte Pipette am Injektorarm. Richten Sie das distale Ende der Pipette am Bregma aus und setzen Sie die stereotaktischen Koordinaten auf Null.

Schieben Sie die Pipette unter Verwendung der in Tabelle 1 aufgeführten anterioren, hinteren und medialen lateralen Koordinaten bis zum ersten Injektionspunkt vor. Schieben Sie dann die Pipette zur kortikalen Oberfläche vor und stellen Sie die dorsale ventrale Messung auf Null. Senken Sie die Pipette langsam auf die dorsale Bauchkoordinate ab.

Stellen Sie sicher, dass die stereotaktische Mikroskopvergrößerung auf 3X eingestellt ist und dass das kalibrierte Fadenkreuz deutlich zu sehen ist. Betrachten Sie die abgewinkelte Pipette von der Seite, so dass der Luftflüssigkeitsmeniskus eine sagittale Ansicht hat. Der Meniskus sollte in der gleichen Brennebene wie die Innen- und Außenwand der Pipette erscheinen.

Mit einem Injektionssystem mit niedrigem Volumendruck, das auf 20 PSI für 20-Millisekunden-Impulse eingestellt ist, injizieren Sie nun 100 Nanoliter L-Nio in das Gehirn. Warten Sie nach der Injektion des Gesamtvolumens 5 Minuten, um einen Rückfluss in der Pipettenspur zu verhindern. Ziehen Sie dann die Pipette heraus und wiederholen Sie den Injektionsvorgang am zweiten und dritten Koordinatensatz in Tabelle 1.

Entfernen Sie nach der letzten Injektion die Pipette und geben Sie so viel Knochenwachs, dass die Kraniotomiestelle gefüllt ist. Zum Schluss die Ränder der Kopfhautwunde annähern und mit Hautkleber verbinden.