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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:42 Min. • July 8th, 2025
Legen Sie die aus Neuroblastomzellen isolierten Mitochondrien in einen Puffer, der membranundurchlässigen, calciumbindenden Fluoreszenzfarbstoff enthält.
Inkubieren, damit sich die Mitochondrien im Puffer stabilisieren können.
Calciumhaltigen Puffer zugeben und unter Schütteln inkubieren.
Die Kalziumionen binden an die Farbstoffmoleküle und bewirken deren Fluoreszenz.
Überwachen Sie mit einem Fluoreszenzspektrometer die Fluoreszenz des Farbstoffs in Echtzeit.
Injizieren Sie nun in regelmäßigen Abständen kalziumhaltigen Puffer
.Die erhöhte Kalziumkonzentration fördert die mitochondriale Kalziumaufnahme und reduziert die freien Kalziumionen, die zur Bindung an den Farbstoff zur Verfügung stehen, was zu einer verminderten Fluoreszenz führt.
Sobald die Mitochondrien ihre maximale Kalziumspeicherkapazität erreicht haben, löst eine weitere Kalziumzugabe die Öffnung der mitochondrialen Permeabilitätsübergangspore (mPTP) aus.
Diese Porenöffnung gibt Kalzium aus den Mitochondrien an den Puffer ab, wo es an den Farbstoff bindet und eine erhöhte Fluoreszenz verursacht.
Bestimmen Sie die Gesamtmenge an Kalzium, die zur Induktion der mPTP-Öffnung erforderlich ist, die die mitochondriale Kalzium
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