Immunhistochemie von Gewebeschnitten aus dem Gehirn von Mäusen zur gezielten Befruchtung von Dopamin-Neuronen

Nimm einen polymerbeschichteten Objektträger mit Gewebeschnitten aus dem Gehirn von Mäusen, die Dopamin-Neuronen enthalten, die Tyrosinhydroxylase exprimieren, ein Schlüsselenzym für die Dopaminsynthese.
Umrande die Schnitte mit einem hydrophoben Stift, um eine gleichmäßige Färbung zu gewährleisten.
Fixiere das Gewebe in einer Aceton-Methanol-Lösung, um die Gewebemorphologie zu erhalten.
Spüle mit einem Puffer, der Detergens enthält, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.
Inkubieren Sie mit Primärantikörpern, die auf Tyrosinhydroxylase in Dopaminneuronen abzielen, und waschen Sie sie dann, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fügen Sie mit Fluoreszenzfarbstoff markierte Sekundärantikörper, Kernfarbstoffe und RNase-Inhibitoren hinzu.
Während der Inkubation binden Sekundärantikörper an Primärantikörper, Kernfarbstoffe markieren den Zellkern und RNase-Inhibitoren inaktivieren RNasen.
Mit Puffer spülen. Dehydrieren Sie dann die Gewebeschnitte in zunehmender Ethanolkonzentration.
Inkubieren Sie in Xylol, um das Gewebe zu reinigen.
Die bearbeiteten Gewebeschnitte sind nun bereit für die Laser-Capture-Mikrodissektion, die eine präzise Visualisierung und Dissektion von Dopamin-Zielneuronen