JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:13 Min. • April 28th, 2025
Nimm eine dunkelangepasste, anästhesierte, transgene, weißäugige Fliege.
Die Fliege exprimiert eGFP-markierte TRPL-Ionenkanäle in den Photorezeptoren des Auges.
In der Dunkelheit lokalisiert sich TRPL an den Membranen der Rhabdomere—den Mikrovilli der Photorezeptoren.
Schieben Sie die Fliege mit Druckluft kopfüber in eine Pipettenspitze.
Schneide die Spitze ab und schiebe den Hosenschlitz nach hinten.
Schneiden Sie es erneut und schieben Sie den Flyer nach vorne, bis nur noch sein Kopf herausragt.
Immobilisieren Sie die Spitze in Modelliermasse, die auf einem Objektträger haftet, und legen Sie sie auf einen Fluoreszenzmikroskoptisch, wobei das Auge radial zum Mikroskopobjektiv zeigt.
Geben Sie einen Tropfen Wasser in das Objektiv und senken Sie es dann ab, bis es das Auge berührt.
Nimm Bilder der Photorezeptoren auf.
Messen Sie die Fluoreszenzintensitäten in den Rhabdomen, im Zellkörper und im Hintergrund.
Beleuchten Sie die Fliege mit orangefarbenem Licht, um die TRPL-Translokation zum Zellkörper zu induzieren.
Wiederholen Sie die Bildgebungs- und Fluoreszenzmessungen.
Vergleichen Sie die Bilder, um eine reduzierte rhabdomerale Fluoreszenz nach der Beleuchtung zu beobachten, was auf eine TR
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