JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:47 Min. • April 28th, 2025
Beginnen Sie mit Peptiden, die aus Neuromelanin-Granulaten (NMGs) gewonnen wurden, die aus postmortalem menschlichem Gehirngewebe isoliert wurden.
NMGs, die in Dopamin-produzierenden Neuronen vorkommen, enthalten Neuromelanin-Pigmente, Proteine und Lipide.
Nehmen Sie eine Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)-Säule, die eine stationäre Phase auf Siliziumdioxidbasis enthält, die mit hydrophoben Liganden funktionalisiert ist.
Laden Sie die Peptide auf die Säule.
Hydrophobe Peptide binden stärker an die Säule als hydrophile.
Leitet einen Elutionspuffer durch die Spalte.
Weniger hydrophobe Peptide eluieren zuerst, während mehr hydrophobe Peptide später eluieren.
Die eluierten Peptide gelangen in die Elektrospray-Ionisationsquelle des Massenspektrometers, wo sie in geladene Peptidionen ionisiert werden.
Die ionisierten Peptide gelangen dann in den Massenanalysator, wo sie auf der Grundlage ihres Masse-zu-Ladungs-Verhältnisses getrennt werden.
Ein ausgewähltes Peptidion wird zur Kollisionszelle geleitet und in kleinere Ionen fragmentiert, deren Masse-Ladungs-Verhältnis erneut gemessen wird.
Schließlich werden die Daten mit einer Referenzdatenbank verglichen, um die in der NMG-Probe vorha
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