JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:01 Min. • April 28th, 2025
Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte mit flachem Boden, die mit einer Basalmembranmatrix beschichtet ist, die extrazelluläre Polymer- und Adhäsionsproteine enthält, die die Matrix der Tumormikroumgebung nachahmen.
Führe ein Medium ein, das eine Neurosphäre aus Gliomzellen enthält, die von einem pädiatrischen Hirntumor abgeleitet sind, und stelle sicher, dass sie zentral im Brunnen positioniert ist.
Die Matrix fördert die Bindung der Neurosphäre an den Brunnen.
Fügen Sie ein Hintergrundsuppressor-Reagenz hinzu, um unspezifische Fluoreszenz zu minimieren.
Als nächstes führen Sie grüne Fluorophor-konjugierte Anti-CD44-Antikörper ein.
Übertragen Sie die Platte in ein Lebendzell-Bildgebungssystem, das in einem Inkubator untergebracht ist und die physiologischen Bedingungen der Zelle aufrechterhält.
Im Laufe der Zeit exprimieren Gliomzellen das Zelladhäsionsprotein CD44, das mit den Adhäsionsproteinen interagiert.
Dies aktiviert den Zellsignalweg und erleichtert die Zellmigration aus der Neurosphäre.
Die Fluorophor-konjugierten Anti-CD44-Antikörper binden an das exprimierte CD44 auf den Gliomzellen und lassen sie fluoreszieren.
Das Auftreten von grün fluoreszierenden Zellen, die sich von der
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos