JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:38 Min. • April 28th, 2025
Nimm neuroendokrine Dünndarmtumor-Sphäroide in einer Tube.
Füge eine Fixierlösung hinzu, um die Zellen zu erhalten.
Zum Waschen, zentrifugieren und das Fixiermittel durch Puffer ersetzen.
Zentrifugen und den Überstand entsorgen, um das restliche Fixiermittel zu entfernen.
Füge einen Puffer hinzu, der Detergens und ein Blockierungsmittel enthält, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Antikörperbindungen zu verhindern.
Mit Puffer waschen, um überschüssiges Waschmittel und Blockiermittel zu entfernen.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die an das für die neuroendokrine Zelle spezifische Zielprotein binden.
Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fluorophor-markierte Sekundärantikörper hinzufügen, die an die primären Antikörper binden.
Mit Puffer spülen, um überschüssige Antikörper zu entfernen.
Füge ein Einbettmedium hinzu, das einen Farbstoff enthält, um den Zellkern zu färben.
Übertragen Sie die Sphäroide auf eine Folie und montieren Sie sie mit einem Deckglas.
Verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop, um neuroendokrine Zellen des Sphäroids zu visualisieren, die spezifische Proteine exprimieren.
Fixiere die Organoide, indem du 500 Mikroliter Parafor
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