JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:02 Min. • April 28th, 2025
Platzieren Sie Gehirnschnittstanzen von gesunden und neurodegenerativen Mäusen auf Probenbildschirmen.
Drehen Sie die Siebe um und legen Sie sie in eine Taschentuchplatte.
Nehmen Sie eine vorkalibrierte Sensorpatrone mit Sensorsonden. Laden Sie die Verbindungen – Pyruvat, Oligomycin, FCCP und Antimycin A – in die Injektionsöffnungen.
Legen Sie die Patrone auf die Gewebeplatte. Starten Sie den Lauf in einem extrazellulären Flussanalysator.
Die Sonden messen die Sauerstoffverbrauchsrate (OCR) der Scheibe.
Mit der ersten Injektion dringt Pyruvat in die Mitochondrien ein und erzeugt Elektronenträger.
Diese Ladungsträger geben Elektronen an die Komplexe I und II der Elektronentransportkette (ETC) ab und initiieren so eine Elektronentransferreaktion, die den Sauerstoffverbrauch und die OCR erhöht.
Oligomycin hemmt den Komplex V, stoppt die ATP-Synthese und verringert die OCR.
FCCP, ein Protonophor, stört den Protonengradienten und erhöht den Sauerstoffverbrauch und die OCR.
Antimycin A bindet an Komplex III und stoppt die ETC, wodurch die OCR minimiert wird.
Vergleichen Sie die OCR-Profile.
Eine verminderte OCR in den neurodegenerativen Schnitten deutet auf eine mitochondriale Beeinträchtigung hin
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