Lebendzell-Phagozytose-Assay von Mikroglia-ähnlichen Zellen unter Verwendung humaner Synaptosomen

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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.799999999999999999;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Mikroglia-ähnlichen Zellen mit phagozytärer Aktivität.

Inkubieren Sie mit einem Kernfleck, um Kerne zu markieren.

Fügen Sie der Negativkontrollvertiefung einen Aktinpolymerisationsinhibitor hinzu.

Während der Inkubation bindet der Inhibitor an Aktinfilamente und hemmt so die Aktinpolymerisation und Phagozytose.

Halten Sie die Platte auf niedrigen Temperaturen und fügen Sie pH-empfindliche Farbstoff-markierte menschliche Synaptosomen hinzu - isolierte Fragmente neuronaler synaptischer Enden.

Zentrifugieren Sie die Platte bei niedrigen Temperaturen, um Zell-Synaptosomen-Wechselwirkungen zu fördern, aber eine vorzeitige Aufnahme zu verhindern.

Übertragen Sie die Platte an ein Lebendzell-Bildgebungssystem.

In der Testvertiefung werden Synaptosomen phagozytiert und verschmelzen mit Lysosomen, die Phagolysosomen bilden. Das lysosomale saure Milieu aktiviert den Farbstoff, was zu seiner Fluoreszenz führt.

Im Laufe der Zeit werden in der Testvertiefung mehr Synaptosomen verschlungen, was zu einer weiteren Zunahme der Fluoreszenz