JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:06 Min. • April 28th, 2025
Nimm eine chemisch fixierte Netzhaut, die aus dem Auge einer Ratte isoliert wurde.
Das Auge weist eine hitzeinduzierte Schädigung des limbalen Gefäßplexus auf, einem Netzwerk von Blutgefäßen, das die Hornhaut umgibt.
Dieser Schaden blockiert den Flüssigkeitsabfluss, erhöht den Augeninnendruck (IOD) und führt zur Degeneration der retinalen Ganglienzellen (RGC).
Behandeln Sie die Netzhaut mit einer Permeabilisierungslösung, um die Zell- und Kernmembranen zu permeabilisieren.
Wenden Sie eine Blockierungslösung an, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Entfernen Sie die blockierende Lösung.
Primäre Antikörper einführen, die auf einen Transkriptionsfaktor abzielen, der überwiegend in RGCs exprimiert wird.
Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper einführen, die an die Primärantikörper binden.
Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Gegenfärbung der Zellkerne mit einem DNA-bindenden Farbstoff.
Waschen Sie die Netzhaut und montieren Sie sie mit einem geeigneten Eindeckmedium auf einen Objektträger.
Visualisieren Sie die Netzhaut unter einem Epifluoreszenzmikroskop.
Eine im Vergleich zur Kontrolle reduzierte Zelldichte im geschä
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