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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:34 Min. • April 28th, 2025
Nehmen Sie einen Objektträger mit einer Monolayer-Kultur aus mikrovaskulären Endothelzellen des Rattengehirns, kurz RBMECs.
Die Zellen sind durch Tight-Junction-Proteine verbunden, die mit dem Aktin-Zytoskelett verbunden sind und die Endothelschicht der Blut-Hirn-Schranke nachahmen.
Ersetzen Sie das Medium durch ein sauerstoffarmes, glukosefreies Medium und legen Sie dann den Objektträger in eine Hypoxiekammer.
Die Nichtverfügbarkeit von Sauerstoff und Glukose hemmt die ATP-Synthese. Das verbleibende ATP wird in Nukleotidderivate zerlegt.
ATP-Mangel behindert die Kalziumpumpen und erhöht das intrazelluläre Kalzium, das die Oxidoreduktase-Enzyme aktiviert.
Als nächstes füllst du das Objekt mit einem sauerstoffhaltigen Medium auf und legst es dann in einen sauerstoffhaltigen Inkubator. Die aktivierten Oxidoreduktasen nutzen den wieder eingeführten Sauerstoff, um die Nukleotidderivate abzubauen, wodurch reaktive Sauerstoffspezies oder ROS entstehen.
ROS unterbricht die Wechselwirkungen zwischen Tight-Junction-Proteinen und induziert Signalwege, die das Aktin-Zytoskelett in Stressfasern umgestalten, wodurch die Zell-Zell-Interaktionen geschwächt werden.
Die Monoschicht mit gestörten interzell
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