JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:11 Min. • April 28th, 2025
Nehmen Sie einen Netzhautschnitt einer Maus auf einem Elektronenmikroskopiegitter. Der Abschnitt enthält retinale Ganglienzellen (RGCs), die synaptisch mit bipolaren Zellen verbunden sind.
Präsynaptische Bipolarzellen enthalten Neurotransmitter-Vesikel, die in einer Bandstruktur in der Nähe der synaptischen Membran angeordnet sind.
Postsynaptische RGCs weisen geclusterte Neurotransmitterrezeptoren auf ihrer Membran auf. Diese Zellen sind mit Choleratoxin Subunit B oder CTB markiert.
Mit einem Puffer waschen, um den pH-Wert zu halten.
Inkubieren Sie mit einem Blockierungspuffer, um unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf die Neurotransmitterrezeptoren und CTB abzielen.
Mit einem Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen und den pH-Wert zu halten.
Inkubieren Sie mit Sekundärantikörpern, die an Goldnanopartikel unterschiedlicher Größe konjugiert sind, die an die Primärantikörper binden und die Zielmoleküle markieren.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper und trocknen Sie die Probe an der Luft.
Tragen Sie Schwermetalle auf, die Makromoleküle binden und den Kontrast verstärken.
Identifizieren Sie mit Hilfe der Elektronenmik
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