Echtzeit-Überwachung der Aktivierung von Geruchsrezeptoren in rekombinanten Zellen

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die adhärente rekombinante Säugetierzellen in einer Stimulationslösung enthält, die mit Luciferin, einem lumineszierenden Substrat, ergänzt wird.

Inkubieren, um Luciferin den Eintritt in die Zelle zu ermöglichen.

Diese Zellen exprimieren membrangebundene Geruchsrezeptoren, die mit olfaktorischen G-Proteinen und Rezeptor-Transportproteinen gekoppelt sind.

Zusätzlich exprimieren die Zellen zytoplasmatische Glosensor-Proteine, lumineszierende Proteine, die empfindlich auf zyklisches AMP reagieren.

Geben Sie eine verdampfbare Odorierlösung in den Raum zwischen den Vertiefungen und platzieren Sie die Platte in einem Luminometergerät, das mit demselben Odorant voräquilibriert ist.

Lumineszenzmessung starten.

Geruchsmoleküle binden an die Geruchsrezeptoren der Zellen, aktivieren das gekoppelte G-Protein und dissoziieren die α Untereinheit des G-Proteins oder Gα.

Die dissoziierte Gα-Untereinheit bindet an das membraneingebettete Adenylatcyclase-Enzym und aktiviert es. Das aktivierte Enzym wandelt die ATPs in zyklische AMPs um.

Diese cyclischen AMPs binden an Glosensorproteine, verändern deren Konformation und ermöglichen die Luciferin-Bindung.

Diese Int