Modellierung der sensorischen Axonregeneration bei einer Ratte mittels Injektion des Spinalganglion und Dorsalwurzelquetschverletzung

Beginnen Sie mit einer betäubten Ratte.

Machen Sie einen Hautschnitt in der Mittellinie zwischen dem zervikalen C2- und dem thorakalen T2-Wirbel

.

Als nächstes schneiden Sie entlang der Mittellinie des weißen faserigen Gewebes ein und ziehen die erste Muskelschicht zurück.

Präparieren Sie das dünne membranöse Gewebe an der Mittellinie der zweiten Muskelschicht und ziehen Sie dann die quergestreiften Längsmuskeln zurück.

Zum Schluss schneidest du die dritte Muskelschicht ein, um die Wirbelsäule freizulegen.

Entfernen Sie die Lamina und den Stiel über den linken Wirbeln C4 bis T1, um die Spinalganglien oder DRGs von C5 bis C8 freizulegen.

Injizieren Sie eine rekombinante adeno-assoziierte Virussuspension in die DRGs.

Das Virus kodiert für ein wachstumsförderndes Protein, das die axonale Regeneration unterstützt.

Quetschen Sie mit einer Pinzette die dorsalen Wurzeln von C5 bis C8, um die axonalen Verbindungen vom DRG zum Rückenmark zu durchtrennen und so eine kontrollierte axonale Verletzung zu erreichen.

Das Modell ist bereit, die virusvermittelte axonale Regeneration zu untersuchen.

Beginnen Sie die Operation, indem Sie die markanten C2- und T2-Dornfortsätze über der Haut lokalisieren. Verwenden Sie dann ein Skalpell mit der Nummer 10, um einen Hautschnitt zwischen den Dornfortsätzen C2 und T2 zu machen. Sobald die Haut geöffnet ist, sollte auf der ersten Muskelschicht eine weiße faserige Gewebemittellinie sichtbar sein, die eine geleeartige Textur hat.

Machen Sie einen ähnlich großen Schnitt in der ersten Muskelschicht entlang der weißen Mittellinie. Gehen Sie nicht über den markanten T2-Dornfortsatz hinaus, da sich in der Nähe ein großes Blutgefäß befindet. Ziehen Sie die erste Muskelschicht mit zwei Retraktoren zurück, von denen einer rostral und einer kaudal angeordnet ist.

Die zweite Muskelschicht mit einem quergestreiften Aussehen sollte nun sichtbar sein. Lokalisieren Sie die Mittellinie der zweiten Muskelschicht, wo zwei Längsmuskeln zu sehen sind, die durch ein dünnes Membrangewebe verbunden sind. Verwenden Sie dann eine Mikroschere, um das membranöse Gewebe zu präparieren und die beiden Längsmuskeln zu trennen.

Stellen Sie die Retraktoren so ein, dass die dritte Schicht des dünnen Maulkorbs, der die Wirbelsäule bedeckt, freigelegt wird. Die Dornfortsätze können durch leichtes Berühren der dritten Muskelschicht mit einer Zange ertastet werden. Mache mit einer Mikroschere einen kleinen Schnitt in der dritten Muskelschicht. Und kratzen Sie den Muskel vorsichtig mit einer Kürette oder einem Skalpell seitlich vom Knochen ab, um die Wirbel deutlich freizulegen.

Um die linken C5 bis C8 DRGs freizulegen, führen Sie mit einem Paar feiner Rongeure eine linke Hemilaminektomie an den Wirbeln C4 bis T1 durch, indem Sie vorsichtig einen Teil der Lamina und des Stiels entfernen. Sobald genügend DRG für die Injektion freigelegt wurde, bereiten Sie die Spritze vor, indem Sie die mit Viren gefüllte Mikroliterspritze, die mit einer speziell angefertigten stumpfen 33-Gauge-Nadel ausgestattet ist, auf den stereotaktischen Spritzenhalter legen. Verwenden Sie als Nächstes eine abgeschrägte 30-Gauge-Nadel, um eine kleine oberflächliche Öffnung an jedem der anvisierten DRG zu machen, um das Einführen der Injektionsnadel zu erleichtern. Passen Sie die stereotaktischen Koordinaten vorsichtig an, um die 33-Gauge-Nadel in die Mitte des DRG einzuführen.

Idealerweise sollte die Nadel genau in der Mitte des DRG platziert werden, um eine gleichmäßige Diffusion der injizierten Lösung im gesamten DRG zu gewährleisten.

Sobald die Nadel eingeführt ist, injizieren Sie mit der Infusionsspritzenpumpe 1 Mikroliter des Virus in jedes DRG. Während der Injektion ändert sich das DRG langsam, wenn die Viruslösung einen farbigen Farbstoff enthält. Führen Sie die Nadel nicht zu stark ein, da dies dazu führen kann, dass Flüssigkeit aus der ventralen Seite des DRG austritt.

Sollte es während der Injektion zu einer Leckage kommen, passen Sie die Position der Nadel sofort an. Ziehen Sie drei Minuten nach Ende der Injektion die Injektionsnadel zurück. Um eine gleichzeitige Verletzung der dorsalen Wurzelquetschung von C5 bis C8 durchzuführen, zerquetschen Sie jede Wurzel dreimal 10 Sekunden lang mit einer Pinzette mit feiner Spitze. Setzen Sie sich den Enden der Pinzette vollständig entgegen. An der Quetschstelle sollte eine weiße Linie im Gewebe erscheinen.