Ein Modell für minimale Rückenmarksverletzungen zur Untersuchung der Aktivierung und Migration neuraler Stammzellen

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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.38;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>Nimm eine betäubte Maus und rasiere ihr den Rücken.

Sichern Sie es in einem stereotaktischen Gerät, mit gerollter Gaze, die so positioniert ist, dass sie die Brustwirbelsäule stützt.

Desinfizieren Sie die Haut, machen Sie einen vertikalen Mittellinienschnitt und ziehen Sie die Haut zurück.

Löse die Muskelsehnen von der Brustwirbelsäule und ziehe sie zurück.

Identifizieren Sie den Zielwirbel und durchtrennen Sie dann die Zwischenwirbelgelenke, um ihn zu entfernen.

Legen Sie das Rückenmark frei und führen Sie eine gebogene Nadel auf beiden Seiten der Mittellinie ein.

Das Einstechen der Nadel verursacht oberflächliche Verletzungen in der weißen Substanz, der äußeren Rückenmarksschicht, die Axonbündel enthält, während der zentrale Kanal intakt bleibt.

Entfernen Sie die Nadel und nähen Sie dann die Muskeln und die Haut.

Geschädigte Zellen setzen Signale frei, die geweberesidente Immunzellen aktivieren, die wiederum neurale Stammzellen oder NSCs aktivieren, die den zentralen Kanal umgeben.

Aktivierte NSCs wandern zur Verletzungsstelle und unterstützen so die Gewebereparatur.

Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, verwenden Sie eine Haarschneidemaschine, um das Fell vom Rücken einer narkotisierten Maus von der Mitte des Rückens bis zum Hals und den Ohren zu entfernen. Nachdem Sie die Maus in einem stereotaktischen Gerät gesichert haben, legen Sie vier bis fünf Stücke gerollte Gaze unter den Bauch, während Sie leicht an der Basis des Schwanzes ziehen, um den Körper und die Wirbelsäule zu begradigen.

Schieben Sie die Thoraxgazerolle rostral vom Mausbauch in Richtung des oberen Brustkorbs, um die Brustwirbelsäule zu stützen. Und verwenden Sie Laborband, um den Schwanz und die Gliedmaßen sternförmig zu fixieren. Nachdem Sie die exponierte Haut mit nacheinander 70%igen Ethanol- und Povidon-Jod-Tupfern desinfiziert haben, verwenden Sie eine Skalpellklinge mit der Nummer 10, um einen vertikalen Schnitt parallel zur Längsachse des Tieres zu machen, von der Mitte beider Schulterblätter bis zur Krümmung der Brustwirbelsäule.

Ziehen Sie die Haut zurück, um das Weichgewebe und die Kontur der Wirbelsäule freizulegen, und identifizieren Sie den unteren Rand des suprascapularen Fettpolsters. Schneiden Sie dann mit dem Skalpell vorsichtig, aber kraftvoll an beiden Seiten der Wirbelknochen T5 bis T8 und 9 entlang, um die hinteren Muskelsehnen von der Wirbelsäule zu lösen. Positionieren Sie die Retraktoren so, dass die Zähne der Retraktoren auf beiden Seiten der Wirbelsäule in die Inzisionsstelle eingeführt werden, und erweitern Sie jeden Retraktor, um die Exposition anzupassen, bis die Wirbelsäule ausreichend angehoben ist, ohne die eingezogenen Muskelschichten zu stark zu belasten.

Reinigen Sie unter einem Operationsmikroskop vorsichtig die verbleibenden Muskeln und andere Weichteile über der Wirbelsäule, um den Wirbelknochen freizulegen, indem Sie den Dornfortsatz der Wirbel mit einer Zahnzange umklammern und die Pinzette leicht auf und ab bewegen, um die Wirbel zu identifizieren, die entfernt werden sollen. Führen Sie dann eine Spitze einer gebogenen, stumpfen Schere in beide Seiten des freiliegenden Foramen intervertebralis, kaudal zur zu exzidierenden Wirbellamina, ein und schneiden Sie die verbindenden Zwischenwirbelgelenke beidseitig durch. Heben Sie dann die Lamina nach oben und schneiden Sie den oberen Ansatz der Lamina ab, um den Knochen zu isolieren und zu entfernen.

Achten Sie beim Abschneiden und Entfernen der Wirbellamina darauf, die Schere immer nach oben zu winkeln, um das darunterliegende Rückenmark nicht zu beschädigen.

Mit der dorsalen Mittellinienvene als Orientierungspunkt führen Sie den um 45 Grad gebogenen Schaft einer 30-Gauge-Nadelspitze mit der schrägen Seite nach oben, 1 Millimeter tief in die dorsolaterale Oberfläche des Rückenmarks und etwa 0,5 Millimeter lateral zu beiden Seiten der Mittellinie ein. Bewegen Sie die Nadel etwa zwei Millimeter von kaudaler in rostrale Richtung, so dass die gesamte Länge der Fase in die Schnur eingeführt wird. Verfolgen Sie dann den Pfad des Eingangs zurück, um die Nadel zu entfernen.

Um die Wunde zu schließen, entfernen Sie den Retraktor und verwenden Sie eine resorbierbare 6-0-Naht, um die Rückenmuskulatur auf beiden Seiten der Verletzung entlang der Mittellinie zu verbinden, und eine 4-0-Seidennaht, um die darüber liegende Haut zu schließen.