JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:56 Min. • April 28th, 2025
Beginnen Sie mit einem chemisch fixierten Gehirnschnitt von nicht-menschlichen Primaten.
Das Fixiermittel auf Aldehydbasis vernetzt Proteine, wobei die Gewebestruktur erhalten bleibt, aber einige reaktive Aldehydrückstände zurückbleiben.
Waschen, um die Kryoprotektivschicht zu entfernen, die den Gewebeabschnitt umgibt.
Fügen Sie ein Reduktionsmittel hinzu, um die reaktiven Aldehydgruppen zu neutralisieren und Reaktionsnebenprodukte zu erzeugen.
Waschen, um diese Nebenprodukte und überschüssige Reduktionsmittel zu entfernen.
Tragen Sie eine Blockierungslösung auf, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf ein Protein abzielen, das an bestimmten Stellen auf der neuronalen Membran exprimiert wird.
Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Biotinylierte Sekundärantikörper zugeben, die auf die Primärantikörper abzielen,
waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Mit Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplexen, die an die Sekundärantikörper binden, überlagert und
erneut waschen, um ungebundene Komplexe zu entfernen.
Führen Sie ein chromogenes Substrat zusammen mit Wasserstoffperoxid ein. In Gegenwart von Wasserstoffperoxid oxidiert das
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