Immunhistochemische Färbung von Biomarkern in Hirntumor-Neurosphärenschnitten

Nehmen Sie eine Folie mit paraffineingebetteten Schnitten von Hirntumor-Neurosphären, Clustern von neuralen Stammzellen, die tumorspezifische nukleäre Protein-Biomarker aufweisen.

Erhitzen Sie, um Paraffin zu schmelzen, entfernen Sie es mit Xylol und rehydrieren Sie das Gewebe mit abnehmenden Alkoholkonzentrationen.

Erhitzen Sie in einem sauren Puffer, der Detergens enthält, um Epitope auf den Biomarkern zu demaskieren und Zellmembranen zu permeabilisieren.

Spülen und dann mit einem Oxidationsmittel behandeln, um endogene Peroxidase-Enzyme zu inaktivieren und unspezifische Signale zu verhindern.

Wenden Sie eine Blockierungslösung an, um unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.

Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf die Biomarker-Epitope abzielen.

Spülen und dann mit Biotin-konjugierten Sekundärantikörpern behandeln, die an die Primärantikörper binden.

Spülen und inkubieren mit einem Peroxidase-Enzym-konjugierten Avidin, das an Biotin bindet.

Fügen Sie ein chromogenes Substrat und ein Oxidationsmittel hinzu.

Peroxidase verwendet das Mittel, um das Substrat in farbige Ausfällungen umzuwandeln und die Position des Biomarkers zu markieren.

Färben Sie die Zellkerne gegen, dehydriere