Eine hydrophobe Gewebereinigungsmethode für eine Gewebeprobe aus dem Gehirn einer Ratte

Beginnen Sie mit einer Gehirngewebeprobe, die aufgrund des Vorhandenseins von Pigmenten und Lipiden nicht transparent ist. Diese Komponenten verursachen Lichtstreuung in fluoreszenzmarkierten Neuronen.

Inkubieren Sie das Gewebe nacheinander in Lösungen mit steigenden Methanolkonzentrationen, um Wasser daraus zu entfernen und das Gewebe allmählich zu dehydrieren.

Behandeln Sie dann dieses Gewebe mit konzentriertem Methanol, um Restwasser zu beseitigen und eine vollständige Austrocknung zu gewährleisten.

Übertragen Sie als nächstes das Gewebe in ein anfängliches Lösungsmittel, das Dichlormethan und Methanol enthält.

Inkubieren Sie durch leichtes Schütteln, damit das Lösungsmittel tief in das Gewebe eindringen kann.

Dichlormethan entfernt Pigmente und Lipide aus dem Gewebe, reduziert die Lichtstreuung und erhöht die Transparenz.

Zum Schluss übertrage das Gewebe auf Dibenzylether, ein hydrophobes Lösungsmittel, und inkubiere es ohne Schütteln.

Das Lösungsmittel fungiert als endgültiges Reinigungsmittel, das die Gewebetransparenz weiter erhöht.

Dieser Prozess verbessert die Lichtdurchlässigkeit und ermöglicht eine klarere Visualisierung von markierten Neuronen und ihren Verbindungen im Gehirngewebe Probe.

Inkubieren Sie die Probe nacheinander in 20 %, 40 %, 60 %, 80 % und 100 % Methanol für jeweils eine Stunde bei Raumtemperatur. Inkubieren Sie es dann über Nacht in frischem 100%igem Methanol. Am nächsten Tag wird die Probe in frisch zubereitetem 66 % DCM in 33 % Methanol drei Stunden lang bei Raumtemperatur unter Schütteln inkubiert. Nach drei Stunden wird die Probe in Dibenzylether ohne Schütteln inkubiert, bis sie klar ist. Bewahren Sie es dann bis zur Bildgebung in Dibenzylether auf.