JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:47 Min. • April 28th, 2025
Beginnen Sie mit einem sezierten Drosophila-Embryo, der auf einem Glasobjektträger befestigt ist und mit Klebeband umgeben ist.
Die Motoneuronen der Fliege sind zur Visualisierung fluoreszierend markiert.
Visualisieren Sie den Embryo mit einem Mikroskop und positionieren Sie eine grün fluoreszierende, lipophile, mit Farbstoffen gefüllte Mikropipette in der Nähe des Embryos.
Wechseln Sie dann in den Fluoreszenzmodus und lokalisieren Sie die axonale Spitze des Motoneurons an der neuromuskulären Verbindung, wo das Motoneuron mit dem Muskel verbunden ist.
Wechseln Sie in den Hellfeldmodus, berühren Sie die Spitze des Zielaxons mit der Pipette, geben Sie einen Farbstofftropfen ab und inkubieren Sie dann.
Aufgrund ihrer lipophilen Natur und axonalen Nähe dringen die Farbstoffe selektiv in die lipidreiche Membran des Zielaxons ein.
Im Laufe der Zeit wandert der Farbstoff rückwärts, bewegt sich rückwärts entlang der axonalen Lipiddoppelschicht in Richtung des neuronalen Körpers und markiert die neuronalen Projektionen.
Entfernen Sie das Klebeband von der Folie und legen Sie ein Deckglas an.
Beobachten Sie den Objektträger unter einem konfokalen Mikroskop.
Das retrograde markierte Zielneuron e
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