Konfokale Bildgebung der mitochondrialen Bewegung in Oligodendrozyten in organotypischen Hirnschnittkulturen

Beginne mit einer konfokalen Mikroskop-Badkammer mit einer zirkulierenden Bildgebungslösung und kontrollierter Temperatur.

Nimm eine hydrophile Polymermembran, die eine organotypische Maushirnscheibe enthält, in der die Oligodendrozyten transduziert wurden, um ein mitochondrienspezifisches rot fluoreszierendes Protein und ein zytosolspezifisches grün fluoreszierendes Protein zu exprimieren.

Die duale Fluoreszenz ermöglicht eine klare Visualisierung der mitochondrialen Dynamik innerhalb des Zytosols des Oligodendrozyten.

Tauchen Sie die Scheibe in die Mitte des Bades und sichern Sie sie mit einem Harfenanker.

Senke das Objektiv und wähle einen gesunden Oligodendrozyten zum Scannen aus.

Passen Sie die Laserleistung an, um Zelltoxizität und Photobleiche zu minimieren.

Setze Mikroskopparameter und nimm dann Zeitrafferbilder von fluoreszenzmarkierten Mitochondrien auf.

Nehmen Sie Z-Stapel-Bilder in verschiedenen Tiefen auf, um eine hochauflösende, dreidimensionale Ansicht der gesamten Zelle zu erhalten.

Verarbeiten Sie die Bilder, um die mitochondriale Bewegung innerhalb der Oligodendrozyten zu visualisieren.

Benutze eine Pinzette, um das Konfetti mit der Scheibe aus der Petrischale an die Obe