JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:54 Min. • April 28th, 2025
Beginnen Sie mit Abschnitten des Mausgehirns, die den dorsalen Hippocampus freilegen, der reich an Neuronen ist.
Fügen Sie Wasserstoffperoxid hinzu, um die neuronale Peroxidaseaktivität zu unterdrücken, gefolgt von einem Waschen.
Behandeln Sie mit einem Permeabilisierungspuffer und wenden Sie dann einen Blockierungspuffer an, um die unspezifische Bindung zu blockieren.
Fügen Sie die primären Antikörper hinzu und inkubieren Sie unter Bewegung. Diese Antikörper binden an neuronale Aktivierungsmarkerproteine.
Waschen und wenden Sie Biotin-konjugierte Sekundärantikörper an, um die primären Antikörper zu binden.
Spülen und einen Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex einführen, der an Biotin auf den Konjugaten bindet.
Erneut waschen, dann ein chromogenes Substrat hinzufügen, das durch Peroxidase oxidiert wird, um einen braunen Niederschlag zu erzeugen. Stoppen Sie die Reaktion mit PBS.
Übertragen Sie die Abschnitte auf einen mit Gelatine beschichteten Objektträger und dehydrieren Sie sie mit steigenden Konzentrationen von Ethanol. Befreien Sie dann die Abschnitte mit Xylol und montieren Sie sie.
Platzieren Sie den Objektträger unter einem Hellfeldmikroskop.
Unter Lichtbeleuchtung lassen ungefärbte
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