Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

Nimm eine anästhesierte transgene Maus, deren Kopf schräg auf einer Halterung befestigt ist, um in vivo die Netzhaut der Maus zu fotografieren.

Die Netzhaut enthält retinale Ganglienzellen oder RGCs, die ein Fluorophor-markiertes Protein exprimieren.

Tragen Sie Augenschmiermittel auf und befestigen Sie ein Deckglas über dem Auge.

Unter einem Mikroskop die Netzhaut gleichmäßig beleuchten, um die fluoreszierenden Proteine in den RGCs anzuregen.

Mit der emittierten Fluoreszenz erhalten Sie eine Weitwinkelansicht der RGCs der Brennebene und der unscharfen RGCs.

Wechsle in den Zwei-Photonen-Bildgebungsmodus und fokussiere niederenergetisches Nahinfrarotlicht in die RGC-Schicht.

Im Brennpunkt regt die kombinierte Energie von zwei Photonen das Fluorophor an, das dann Energie als Fluoreszenz freisetzt.

Da die Anregung auf einen einzigen Punkt beschränkt ist, wird die Fluoreszenz aus anderen Brennebenen minimiert.

Nehmen Sie Bilder in mehreren Fokusebenen entlang der z-Achse auf, um die gesamte RGC-Schicht abzubilden.

Tragen Sie Gleitmittel auf beide Augen der Maus auf. Drehen Sie den Hauptarm des Kopfhalters, bis die Pupille eines Auges in einer Linie mit dem Strahlengang ausgerichtet ist, und s