JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:48 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop, das ein immobilisiertes Zwerchfell mit Zwerchfellnerven einer transgenen Maus enthält.
Die neuromuskuläre Verbindung des Zwerchfells besteht aus einem Motoneuron, einer Muskelfaser und Schwann-Zellen, die Acetylcholinrezeptoren und Kalziumkanäle enthalten.
Diese Zellen haben fluoreszenzmarkierte Acetylcholinrezeptoren und exprimieren intrazelluläre Kalziumindikatoren.
Ein an den Aufbau angeschlossener Bildsplitter ermöglicht die gleichzeitige Visualisierung beider Fluoreszenzsignale.
Der Nervus phrenicus wird in einer Saugelektrode positioniert, um einen elektrischen Reiz abzugeben.
Visualisieren Sie unter dem Fluoreszenzmikroskop Acetylcholinrezeptoren, um eine neuromuskuläre Verbindung zu identifizieren.
Um eine maximale Ausgangsfluoreszenz einzustellen, fügen Sie eine Kaliumchloridlösung hinzu, um die Zellmembran vorübergehend zu depolarisieren. Dies löst einen intrazellulären Kalziumeinstrom aus, was zu einer Erhöhung der Fluoreszenz der Indikatoren führt.
Passen Sie die Helligkeitseinstellungen an, um eine Übersättigung des Fluoreszenzsignals zu vermeiden.
Wenden Sie nach der Repolarisation elektrische Stimulationen an, um den Kalziumeins
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