JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:19 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit einem gereinigten Maus-Hippocampusgewebe, das durch Entfernen von Lipiden optisch transparent gemacht wird. Das Gewebe ist in ein Hydrogel-Netz eingebettet, um Biomoleküle zu stabilisieren und zelluläre Strukturen zu erhalten.
Das Gewebe enthält Astrozyten, die rot fluoreszierendes Protein exprimieren, und exzitatorische Neuronen, die grünes Kernprotein exprimieren, was eine deutliche Visualisierung ermöglicht.
Legen Sie das Gewebe auf einen Objektträger und erstellen Sie mit Heißkleber eine Kammer, wobei Sie einen kleinen Spalt lassen.
Tragen Sie eine Brechungsindex-Matching-Lösung auf, um das Gewebe mit Feuchtigkeit zu versorgen und Blasen zu vermeiden, und versiegeln Sie sie dann mit einem Deckglas.
Füllen Sie die Kammer mit einer Brechungsindex-Matching-Lösung, um die Lichtstreuung zu reduzieren und den Spalt zu schließen.
Visualisieren Sie das Gewebe mit einem Zwei-Photonen-Mikroskop.
Nahinfrarotlicht regt die rot und grün fluoreszierenden Proteine in der Fokusebene an und ermöglicht so eine hochauflösende Bildgebung mit minimaler Lichtschädigung. Fluoreszenzemissionen werden separat detektiert, wodurch die räumliche Nähe zwischen Astrozyten und den Zellkernen
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