JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:00 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie Hippocampus-Hirnschnitte von einer Ratte, die mit Bromodeoxyuridin oder BrdU, einem Nukleosidanalogon von Thymidin, injiziert wurde.
BrdU integriert sich während der Zellteilung in die DNA und markiert neu gebildete Neuronen im Gyrus dentatus, einer Region für die Neurogenese.
Inkubieren Sie mit einem Oxidationsmittel, um endogene Peroxidase-Enzyme zu inaktivieren.
Mit Säure behandeln, um die DNA zu denaturieren und BrdU freizulegen, dann die Säure neutralisieren.
Inkubieren Sie mit einem Detergens zur Permeabilisierung der Zellmembranen und einer Blockierungslösung, um unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf BrdU abzielen, gefolgt von Peroxidase-markierten Sekundärantikörpern, die spezifisch für die primären Antikörper sind.
Führen Sie ein chromogenes Substrat und ein Oxidationsmittel ein, so dass die Peroxidase das Substrat in einen farbigen Rückstand umwandeln kann.
Befestigen Sie das Gewebe und färben Sie es mit einem Nukleinsäure-bindenden Farbstoff gegen.
Dehydrieren Sie das Gewebe und behandeln Sie es dann, um die Transparenz zu erhöhen.
Identifizieren Sie unter dem Mikroskop den Gyrus dentatus.
Analysieren Sie mit der o
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