Untersuchung der Ursprünge sensorischer Neuronen in der Dura mater mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie

Nehmen wir eine betäubte Ratte mit einem freiliegenden Schädel, der mit einem Tuch bedeckt ist.

Bohren Sie ein Loch, um die Dura mater, die äußerste Schicht des Gehirns, freizulegen, die von schmerzempfindlichen sensorischen Neuronen innerviert wird, die aus dem Ganglion trigeminus und den dorsalen Ganglien des Gebärmutterhalses stammen.

Konstruieren Sie eine Barriere, um ein Auslaufen zu verhindern, führen Sie einen retrograden Tracer ein und dichten Sie das Loch ab.

Nähen Sie die Wunde und lassen Sie die Ratte sich erholen.

Der Tracer dringt in die sensorischen neuronalen Axone ein, wandert rückwärts zu ihren Ganglien und dringt in die neuronalen Zellkörper ein.

Euthanasieren Sie die Ratte und präparieren Sie die Ganglien.

Bereiten Sie Abschnitte der Ganglien vor und montieren Sie sie auf Objektträger.

Fügen Sie eine Lösung hinzu, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.

Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf den Tracer und sensorische Neuronen-spezifische Neuropeptide abzielen.

Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper hinzu, die spezifisch für die Primärantikörper sind.

Beobachten Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie