JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:19 Min. • May 29th, 2025
Legen Sie eine chemisch fixierte Maushirnscheibe in eine Glasbodenschale mit Puffer und befestigen Sie sie mit einem Netz.
Schließen Sie eine Elektrode, die mit einem anionischen, hydrophilen Fluoreszenzfarbstoff gefüllt ist, an eine Spannungsquelle an.
Führen Sie eine Masseelektrode in den Puffer ein, um den Stromkreis zu schließen.
Schieben Sie die mit Farbstoff gefüllte Elektrode mit Hilfe einer Hellfeldbeleuchtung in Richtung der Scheibe.
Wechseln Sie zur Infrarot-Differenzialinterferenzkontrastbildgebung, um einen Astrozyten zu lokalisieren.
Durchstechen Sie das Astrozyten-Soma mit der Elektrode, um Zugang zum Zytoplasma zu erhalten.
Wenden Sie elektrischen Strom an, um den Farbstoff durch Iontophorese in das Zytoplasma zu treiben.
Wechseln Sie zur konfokalen Mikroskopie, um die Farbstoffbewegung zu überwachen.
Der hydrophile Farbstoff, der die hydrophobe Membran nicht passieren kann, diffundiert im Zytoplasma, um das Soma und die Äste zu füllen.
Sobald die Zelle gefüllt ist, stoppen Sie den Strom und ziehen Sie die Elektrode heraus.
Lassen Sie die Astrozytenmembran wieder verschließen.
Nehmen Sie Bilder in verschiedenen Z-Ebenen auf und rekonstruieren Sie sie, um die Morphologie der As
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