JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:53 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie ein Deckglas mit einer Kultur von ventralen Mittelhirnneuronen, die von Mausembryonen stammen.
Die Zellen werden mit einem viralen Vektor infiziert, um einen Kalziumindikator zu exprimieren.
Übertragen Sie das Deckglas in die Aufnahmekammer eines konfokalen Mikroskops, das mit einem Aufnahmepuffer durchblutet ist.
Identifizieren Sie mit sichtbarem Licht eine Region mit mehreren Neuronen und wechseln Sie dann zur Fluoreszenzbildgebung.
Bei niedrigen intrazellulären Calciumspiegeln bleibt der Indikator ungebunden und weist eine geringe Fluoreszenzintensität auf.
Intrinsische Eigenschaften der Neuronen erzeugen spontane Aktionspotentiale, die spannungsgesteuerte Kalziumkanäle dazu bringen, sich zu öffnen und den Kalziumeinstrom zu ermöglichen.
Das überschüssige Kalzium bindet an den Indikator und induziert eine Konformationsänderung, die die Fluoreszenzintensität erhöht.
Zeichnen Sie die Fluoreszenzintensität im Laufe der Zeit auf, um die spontane Kalziumaktivität zu verfolgen.
Führen Sie einen Neurotransmitter in hoher Konzentration ein, der an Rezeptoren auf den Neuronen bindet und kontinuierliche Aktionspotentiale erzeugt.
Die anhaltende spannungsgesteuerte Aktivierung des Kalzi
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