JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:14 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit Gehirnschnitten aus einem neurodegenerativen Mausmodell.
Inkubieren Sie mit einer mit Detergenzien angereicherten Blockierungslösung, um die Gewebepermeabilität zu erhöhen und unspezifische Bindungen zu blockieren. Verwerfe die Lösung.
Einführung von Primärantikörpern gegen Amyloid-Beta-Plaques. Inkubieren Sie unter Rühren, damit Antikörper mit Amyloid-Beta-Plaques interagieren, und waschen Sie sie.
Fügen Sie rote Fluorophor-markierte Sekundärantikörper hinzu und inkubieren Sie im Dunkeln, damit die Antikörper interagieren können.
Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen, gefolgt von einer Alkoholwäsche.
Fügen Sie Curcumin hinzu, das beta-Faltblatt-reiche Amyloide mit hoher Affinität bindet, und waschen Sie es dann.
Als nächstes behandeln Sie mit steigenden Alkoholkonzentrationen, wodurch die Gehirnabschnitte dehydriert werden. Fügen Sie Xylol hinzu, um alle Spuren von Reagenzien zu entfernen.
Montieren Sie einen Schnitt auf einen Objektträger und beobachten Sie ihn unter einem Fluoreszenzmikroskop.
Verwenden Sie einen Laser mit einer Wellenlänge von 590 Nanometern, um die roten Fluorophore auf den Sekundärantikörpern anzuregen. Nehmen Sie das Bild auf.
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