JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:41 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie einen fixierten, dicken Gehirnschnitt von einer Maus, die mit dem Tollwutvirus infiziert ist.
Das Virus infiziert Neuronen und repliziert sich, was dazu führt, dass virale Proteine in den Zellen vorhanden sind.
Mit einem Detergens zur Permeabilisierung der Zellmembranen und einer Blockierungslösung zur Maskierung unspezifischer Bindungsstellen behandeln.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf die viralen Proteine abzielen, gefolgt von Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die an die primären Antikörper binden.
Mit einem fluoreszierenden Nukleinsäure-bindenden Farbstoff behandeln, um den Zellkern zu markieren.
Dehydrieren Sie das Gewebe bei steigenden Alkoholkonzentrationen und tragen Sie dann eine Reinigungslösung auf, um die Gewebetransparenz für die Bildgebung zu erhöhen.
Montieren Sie den Schnitt in einer Bildgebungskammer, füllen Sie ihn mit der Reinigungslösung und versiegeln Sie ihn.
Mit der konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie wird das Gewebe separat mit den Fluoreszenzmarkierungen abgebildet und dann zu einem zweidimensionalen Bild zusammengeführt.
Erfassen Sie Bilder in verschiedenen Fokusebenen des Gewebes und kombinieren Sie sie, um eine dreidimensio
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